MicroRNA(miRNA)是具备调控功能的小片段单链RNA分子,可与Argonaute(AGO)蛋白形成RNA诱导的沉默复合体,下调其目标信使RNA(mRNA)来调控基因的表达。miRNA Agomir/Antagomir是随着生物工程发展而出现的可以代替或抑制miRNA功能的RNA分子,由于其效用长久,可调控大部分的信号通路而展现出了令人振奋的基因治疗潜力。安必奇生物为了帮助客户进一步阐明miRNA的作用机制,了解MicroRNA与靶mRNA之间的识别规则,推出了miRNA Agomir/Antagomir靶向性研究服务,可以对指定miRNA Agomir/Antagomir分子的结合趋向进行评估,以减少或避免非必要的mRNA降解。

MicroRNA Agomir/Antagomir靶向性

miRNA与靶基因的结合主要是通过与mRNA 3’端非翻译序列的互补配对来实现,一般在植物中这种互补的程度较高,可以快速准确地实现靶基因的下调;但在动物模型中,miRNA通常是通过不完全的配对影响mRNA的转录过程,从而抑制翻译,而不会对mRNA的水平造成影响。为了获得更强的基因调控能力来应对现代生物医学的需要,经过化学修饰而更加稳定的miRNA Agomir/Antagomir被开发出来,它们可以通过模拟或抑制miRNA来调节基因表达,在经过初步的合成与筛选后,miRNA Agomir/Antagomir的靶向性分析是十分必要的,不但可以为接下来的产品开发与项目研究提供更多的数据支撑,而且有助于进一步了解Agomir/Antagomir的作用机制,并减少脱靶情况的出现。

早期miRNA的靶向性是通过遗传分析来检验其与mRNA序列的互补性,这种方法应用于植物细胞时可以非常准确地鉴定出许多靶标;但对于动物模型而言,有时会出现广泛的互补配对产生非目标切割。因此,对于动物miRNA靶向分析需要设计一种全基因组的搜索计算方法来捕获大多数的调控靶标而又不会带来太多错误的预测。

MicroRNA靶点类型。 图1. MicroRNA靶点类型。(Bartel, 2009)

MicroRNA Agomir/Antagomir靶向性分析技术

安必奇生物的miRNA Agomir/Antagomir平台可以帮助客户深入研究miRNA Agomir/Antagomir的靶向过程,不但可以帮助您阐明mRNA识别和调控的机制,还可以通过识别新的靶标来提供各种疾病模型的药物开发靶点,减少脱靶的情况并提高治疗效果。我们的平台可以通过以下技术来帮助您研究miRNA Agomir/Antagomir的靶向性:

  • 使用差异基因表达来鉴定miRNA Agomir/Antagomir靶标;
  • 通过RISC组分Argonaute(AGO)或TNRC6的免疫共沉淀来鉴定直接的miRNA靶标;
  • 通过交联免疫沉淀分离的RNA的高通量测序;
  • 光活化核糖核苷增强交联和免疫沉淀;
  • 用生物素化的miRNA双链和捕获的miRNA富集miRNA靶标;
  • RNA末端的并行分析,通过对修饰的5' RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增程序进行产物的高通量测序,在总体上鉴定mRNA裂解产物。

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参考文献:

  1. Bartel, D.P. MicroRNAs: target recognition and regulatory functions. cell. 2009, 136(2): 215-233.

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